定制抗体亮点：领域特定的淀粉样前体蛋白（APP）抗体

淀粉样前体蛋白（APP）是770个氨基酸的单程跨膜糖蛋白（图1）。众所周知，APP可以在脑组织和其他地方进行蛋白水解切割，从而产生两个重叠的肽，这与阿尔茨海默氏病的病因有关（Nunan和Small，2000； Selkoe，2000）。这两个肽被称为Ab1-40和Ab1-42（或-43），分别对应于残基672-711和672-713（或714），均位于G700的细胞外跨膜边界。 

 直到最近，APP相关研究的主要焦点一直可以理解为Ab肽域。这些肽被一组膜相关的蛋白酶（即分泌酶a和g）从APP上切割下来，产生自发聚集在细胞外的Ab肽。这些聚集体形成了独特的淀粉样蛋白斑块，在人脑活检和尸检切片中，这些淀粉样蛋白斑是阿尔茨海默氏病的病原学（Selkoe，2000; Hardy and Selkoe，2002）。

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因此，APP的一个持久的奥秘涉及其余蛋白质的功能。当然，有很多理由认为APP不仅仅是导致这种毁灭性痴呆的原因。从昆虫到人类，APP在整个动物界都得到了广泛的表达和高度的保护（Coulson等，2000）。它在各种各样的胎儿组织中表达，在脑，肾，心脏和脾脏中的表达特别高（Weidemann et al。，1989）。此外，APP蛋白质内还有与其他蛋白质的已知功能域共享同源性的序列。例如，APP的细胞外E1和E2结构域与泛素基因产物内的功能域具有明显的序列同源性（Olsen和Lima，2013）。在这种情况下，这些区域被认为是肝素和金属结合域，并且是介导蛋白质-蛋白质相互作用的良好候选者。位于APP的E1和E2域之间的Kunitz（丝氨酸蛋白酶）抑制剂域提供了关于APP功能的另一种潜在见解。但是，APP内的该结构域不太可能抑制已知可产生Ab肽的a和g分泌酶，因为它们是非丝氨酸蛋白酶，并且不受Kunitz丝氨酸蛋白酶抑制剂的抑制。

其他各种研究表明，APP的非Ab区可能在神经系统修复中起作用。众所周知，脑外伤会导致人和小鼠APP的上调（Hortobagyi等，2007）。而且，APP的可溶性细胞外区域可以起到减轻脑外伤作用的作用（Thornton等，2006； Corrigan等，2012），提示了某种保护作用。大量研究表明，APP的E1和E2肝素和金属结合域参与了这种保护，尽管这种保护的机制尚不清楚（cf，Zhou等，2011）。

另一方面，APP的短细胞内结构域似乎也在脑形态发生中起作用（Klevanski等人，2015）。在这里，APP上非常保守的YENPTY序列（包含在Aves的cAPP抗体识别的肽中）似乎是神经肌肉连接和海马体正确形态发生所必需的。缺少YENPTY主题的基因敲除小鼠表现出肌肉无力，以及海马相关行为（如空间学习）的缺陷。

最后，在神经元迁移的无脊椎动物模型中，APP被发现在调节神经母细胞沿肠道运动的程度方面发挥了作用。这种调节似乎涉及APP中与异三聚体G蛋白Goa相互作用的细胞内结构域（Swanson等，2005; Ramaker等，2016; Ramaker and Copenhaver，2017）。在哺乳动物中，APP的可溶性细胞外片段以高特异性与另一种参与神经元迁移的蛋白质SorLA / LR11结合（Andersen等，2006）。

为了开发针对APP不同功能区域的抗体试剂，我们首先将人类APP序列（NCBI登录号NP_000475.1）插入我们专有的ImmunogenicityAlgorithm®中。从最初的30个候选序列中，选择了大约12个肽序列，确保我们覆盖了该基因产物的整个长度。由于技术原因，我们在该序列的N端添加了一个半胱氨酸和一个合成的间隔氨基酸，以提高缀合和亲和纯化的效率。然后在7周内将这些肽的KLH偶联物注射到蛋鸡的乳房肌肉中，并在第4次注射后收集卵。然后制备亲和纯化的抗体，并将其发送至各种合作者，以确定哪些抗体表现出有用的免疫组织化学信号。一旦鉴定出有用的抗体，我们就向用于制备初始抗体制剂的相同母鸡中进行额外注射，收集额外的卵，并进行额外的亲和纯化抗体。

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总之，Aves Labs提供了多种针对APP基因产物内各种肽序列的特异性抗体，这些抗体可用于这种神秘蛋白的功能，其误加工可能导致毁灭性的人类疾病。

 

参考资料

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